Colony overexpression
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작성일 23-10-30 06:36
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colonyoverexpression , Colony overexpression공학기술레포트 ,
3.Methods
① transformation된 E coli를 kanamycin(100 ug/ml)이 첨가된 LB배지에 접종
② 섭씨 37도에서 culture하여 흡광도 600nm에서 OD값이 0.6이 되도록 배양
③ IPTG를 농도가 1mM이 되도록 첨가, 발현 유도
3시간 Induction시킨 것 (조교들이 준비해줌) / experiment(실험) 시간에 1시간 induction시킨 것transformation만 된것, trnasformation안된 것
④ supernatant(상층액)을 버리고 pellet(하층에 남은 덩어리)만 남긴 후 sample buffer를 30㎕넣어준다.
레포트/공학기술
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재조합 DNA를 숙주 세포(대장균)에 삽입(transformation)하여 그것을 다량 발현하는 실험의 리포트입니다. 전사후 단백질의 생성 정도…(To be continued )
설명
다.
⑤ water bath에서 5분간 boiling
⑥ pellet을 resuspension시킨다.
induction을 하지 않은 것은 곧, IPTG가 포함되지 않았다는 의미이다. 그러므로 발현되지 않았을 것이다. IPTG가 포함되지 않으면
전사되지 않고 유전자 발현이 일어나지 않는다.
⑦ centrifuging하여 pellet을 얻는다. induction의 기간의 조절한 것으로 보아 시간에 따른 차이가 있어야 할 것 같다..
⑧ loading
4.Resulttransformation되지 않은 것은 DNA 발현 조차 불가능 할 것이다.
colonyoverexpression
Colony overexpression
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재조합 DNA를 숙주 세포(대장균)에 삽입(transformation)하여 그것을 다량 발현하는 실험의 리포트입니다.
